Celpassage verwijst naar het proces waarbij cellen in kleinere porties worden verdeeld, opnieuw in een andere kweekcontainer worden geplaatst en vervolgens opnieuw worden gekweekt. Celkweekflessen zijn een veelgebruikt verbruiksartikel tijdens de passage. Dus wat zijn de specifieke stappen voor celpassage?
1. Haal de celkweekfles uit de incubator, spuit 75 procent alcohol op het oppervlak van de fles met een alcoholspuitfles en breng deze over naar de ultraschone werkbank.
2. Open het deksel van de celcultuurkolf, zuig voorzichtig het oude medium op, voeg een geschikte hoeveelheid PBS-bufferoplossing toe met een Pasteur-pipet, was deze 1-2 keer en gooi de PBS-bufferoplossing weg.
3. De celkweekfles kan met een pipet worden aangevuld met 1-2ml trypsine, en het "kruis" wordt geschud om volledig contact te maken met de trypsine en de cellen.
4. Breng de celkweekfles met trypsine over naar het omgekeerde microscoopstadium, observeer de vertering van de cellen onder de microscoop, en wanneer de cellen rond worden en een groot aantal eraf valt, bereid je dan voor om de vertering te beëindigen. Spuit 75 procent alcohol op het oppervlak van de kolf en breng deze over naar de ultraschone werkbank.
5. De celkweekfles wordt aangevuld met een gelijke hoeveelheid serumhoudend medium en de ontsluiting wordt beëindigd. De pipet wordt volledig opgeblazen en geslagen om de cellen er volledig af te laten vallen.
6. Breng de gemengde vloeistof in de celcultuurkolf over naar een centrifugebuis, breng deze in evenwicht en centrifugeer ongeveer 5 minuten.
7. Nadat de celkweekfles is gecentrifugeerd, besproeit u het oppervlak van de centrifugebuis met een alcoholspuitfles, brengt u deze over naar de ultraschone werkbank, opent u het deksel en giet u het supernatant in de afvalvloeistofcilinder.
8. Voeg een passend volume serumhoudend medium toe aan de celkweekfles en klop deze voorzichtig met een pipet of pasteurpipet om een celsuspensie te bereiden.
9. Verdeel de celsuspensie in 2 (of meer) steriele en schone celcultuurflessen, voeg een geschikte hoeveelheid medium toe en sluit het deksel.
10. Plaats de verdeelde celkweekflessen op het omgekeerde microscoopplatform en observeer de celsituatie. Het aantal cellen moet gegarandeerd zijn. Te weinig cellen zullen hun groei beïnvloeden.
11. Breng een etiket aan op de kolf van de celkweekkolf, waarop de passagetijd, het celtype, de operator en andere informatie worden vermeld. Voordat u het in de couveuse plaatst, spuit u wat alcohol op het oppervlak van de fles, organiseert u de operatietafel, veegt u de ultraschone bank af met 75 procent alcohol en ruimt u de afvalvloeistof en het afval op.
Het bovenstaande is het specifieke proces van celpassage met behulp van celkweekflessen. Tijdens de operatie moet aandacht worden besteed aan het dragen van steriele kleding, steriele handschoenen en maskers, en de gehele operatie moet aseptisch worden uitgevoerd om besmetting van de cellen te voorkomen.
met citraatbloedbuizen, edta-scheidingsbuis, niet-gefilterde pipetpunten, fabrikant van gelpipetpunten